色譜柱使用前要做什麼

1、使用前的處理:在使用緩衝鹽作流動相之前需要用不含緩衝鹽的流動相沖洗色譜柱，直至基線平穩。原則上，用於沖洗的流動相與分析時所用的流動相含水的比例相同（或含水更多），不同的只是用於沖洗用的流動相中不含緩衝鹽。理由、緩衝鹽通常易溶於水，難溶於有機溶劑。用含緩衝鹽的（特別是做流動相的水為飽和的緩衝鹽溶液時）流動相進行分析時，如果分析前色譜柱中用於儲存色譜柱的流動相中含水的比例相對較小，不先沖洗掉，接下來做樣品的時候所用的流動相中如果有機溶劑含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解該緩衝鹽時，緩衝鹽將會在色譜柱柱體上析出，沉積下來，這將可能導致上述對色譜柱的損害。

2、使用後的處理：用與分析時含水比例相同的流動相（與分析用流動相唯一的區別是，用於沖洗的流動相不含緩衝鹽）進行沖洗約30min，直至基線平穩。如果該色譜柱在接下來很長的一段時間內不使用，要長期儲存，則需再加上一步，即用純的有機溶劑沖洗一遍，直至基線平穩。用與分析時含水比例相同的流動相（與分析用流動相唯一的區別是，用於沖洗的流動相不含緩衝鹽）進行沖洗約30min，直至基線平穩。如果該色譜柱在接下來很長的一段時間內不使用，要長期儲存，則需再加上一步，即用純的有機溶劑沖洗一遍，直至基線平穩.緩衝液可以提供離子平衡的反離子，並使流動相保持一定的離子強度和ph值，減少拖尾。

小編還為您整理了以下內容，可能對您也有幫助：

1、使用前的處理:在使用緩衝鹽作流動相之前需要用不含緩衝鹽的流動相沖洗色譜柱，直至基線平穩。原則上，用於沖洗的流動相與分析時所用的流動相含水的比例相同（或含水更多），不同的只是用於沖洗用的流動相中不含緩衝鹽。理由、緩衝鹽通常易溶於水，難溶於有機溶劑。用含緩衝鹽的（特別是做流動相的水為飽和的緩衝鹽溶液時）流動相進行分析時，如果分析前色譜柱中用於儲存色譜柱的流動相中含水的比例相對較小，不先沖洗掉，接下來做樣品的時候所用的流動相中如果有機溶劑含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解該緩衝鹽時，緩衝鹽將會在色譜柱柱體上析出，沉積下來，這將可能導致上述對色譜柱的損害。

2、使用後的處理：用與分析時含水比例相同的流動相（與分析用流動相唯一的區別是，用於沖洗的流動相不含緩衝鹽）進行沖洗約30min，直至基線平穩。如果該色譜柱在接下來很長的一段時間內不使用，要長期儲存，則需再加上一步，即用純的有機溶劑沖洗一遍，直至基線平穩。用與分析時含水比例相同的流動相（與分析用流動相唯一的區別是，用於沖洗的流動相不含緩衝鹽）進行沖洗約30min，直至基線平穩。如果該色譜柱在接下來很長的一段時間內不使用，要長期儲存，則需再加上一步，即用純的有機溶劑沖洗一遍，直至基線平穩.緩衝液可以提供離子平衡的反離子，並使流動相保持一定的離子強度和ph值，減少拖尾。

新買的高效液相色譜柱在正式使用之前需要做什麼？比如什麼配比的流動相沖洗？

新購買的“高效液相色譜柱”一般 需要做一下3點：

1：用甲醇沖洗柱子30分鐘到1個小時；

2：在1的步驟下，使用甲醇：水=1：:9 作為流動相沖洗柱子30分鐘以上；

3：完成上面2步才能用流動相沖洗柱子30分鐘以上。再進樣。

上面得甲醇為色譜級，水一般選擇超純水、二次蒸餾水。流動相都需過0.45um的膜過濾、脫氣才可以使用。

另外：流動相應選擇合適的PH更好的保護柱子

很長時間不用的色譜柱要用了，需要做什麼前處理麼？

如果色譜柱的堵頭，兩邊都密封得很好的話應該沒什麼問題。

可以先拿甲醇或者乙腈，低流速，0.4-0.6ml/min沖洗半個小時。然後在用甲醇水衝開。長時間不用，柱子裡面的甲醇或者乙腈有可能揮發掉了，到時候就可能會幹了。先用低流速衝一陣子，免得對填料有損傷。

新色譜柱第一次使用需要注意些什麼

第一次使用前，最好先處理一下。我們一般是用65%的乙腈/水溶液在0.1-0.5ml/min低速的情況下衝20min，這一過程最好別接檢測器。然後，再漸漸將流速調至1ml/min繼續衝2-8小時。

平時使用的時候，注意色譜柱適用的PH值範圍、水相的比例（長時間使用水相比例高的流動相會損傷ODS柱）。在使用含有緩衝鹽的流動相時，更換前要注意用含水量較多的甲醇過渡，使用完畢後也要含水量較多的甲醇過渡沖洗。

如何正確地使用色譜柱

1、吸附柱色譜

吸附色譜的原理：在一定條件下，矽膠與被分離物質之間產生作用，這種作用主要是物理和化學作用兩種.物理作用來自於矽膠表表面與溶質分子之間的範德華力.化學作用主要是矽膠表面的矽羥基與待分離物質之間的氫鍵作用。

色譜管為內徑均勻、下端縮口的硬質玻璃管，下端用棉花或玻璃纖維塞住，管內裝入吸附劑。吸附劑的顆粒應儘可能保持大小均勻，以保證良好的分離效果。除另有規定外，通常多采用直徑為0.07～0.15mm的顆粒。色譜柱的大小，吸附劑的品種和用量，以及洗脫時的流速，均按各品種項下的規定。

2、分配柱色譜

方法和吸附柱色譜基本一致。裝柱前，先將載體和固定液混合，然後分次移入色譜柱中並用帶有平面的玻棒壓緊；供試品可溶於固定液，混以少量載體，加在預製好的色譜柱上端。洗脫劑需先加固定液混合使之飽和，以避免洗脫過程中兩相分配的改變。

擴充套件資料：

色譜柱的大小規格由待分離樣品的量和吸附難易程度來決定。一般柱管的直徑為0.5～l0 cm，長度為直徑的10～40倍。填充吸附劑的量約為樣品重量的20～50倍，柱體高度應占柱管高度的3/4，柱子過於細長或過於粗短都不好。

裝柱前，柱子應乾淨、乾燥，並垂直固定在鐵架臺上，將少量洗脫劑注入柱內，取一小團玻璃毛或脫脂棉用溶劑潤溼後塞入管中，用一長玻璃棒輕輕送到底部，適當搗壓，趕出棉團中的氣泡，但不能壓得太緊，以免阻礙溶劑暢流 （如管子帶有篩板，則可省略該步操作）。再在上面加入一層約0.5 cm厚的潔淨細砂，從對稱方向輕輕叩擊柱管，使砂面平整。

常用的裝柱方法有幹裝法和溼裝法兩種。

1、幹裝法：在柱內裝入2/3溶劑，在管口上放一漏斗，開啟活塞，讓溶劑慢慢地滴入錐形瓶中，接著把幹吸附劑經漏斗以細流狀傾瀉到管柱內，同時用套在玻璃棒 （或鉛筆等）上的橡皮塞輕輕敲擊管柱，使吸附劑均勻地向下沉降到底部。

填充完畢後，用滴管吸取少量溶劑把粘附在管壁上的吸附劑顆粒衝入柱內，繼續敲擊管子直到柱體不再下沉為止。柱面上再加蓋一薄層潔淨細砂，把柱面上液層高度降至0.1～l cm，再把收集的溶劑反覆迴圈通過柱體幾次，便可得到沉降得較緊密的柱體。

2、溼裝法：基該方法與幹裝法類似，所不同的是，裝柱前吸附劑需要預先用溶劑調成淤漿狀，在倒入淤漿時，應儘可能連續均勻地一次完成。如果柱子較大，應事先將吸附劑泡在一定量的溶劑中，並充分攪拌後過夜 （排除氣泡），然後再裝。

無論是幹裝法，還是溼裝法，裝好的色譜柱應是充填均勻，鬆緊適宜一致，沒有氣泡和裂縫，否則會造成洗脫劑流動不規則而形成“溝流”，引起色譜帶變形，影響分離效果。

參考資料來源：百度百科-柱色譜

樣品溶液進色譜柱前應做如何處理

樣品溶液進色譜柱前應這樣處理：

樣品預處理應包括進樣前的一切操作。除了稱重、溶解、稀釋等步驟外,樣品需要: ①過濾; ②萃取; ③衍生化(柱前衍生) ; ④液相色譜(低壓柱層析) 。這些操作可以是手工進行或實行自動化操作。樣品預處理的目的是除去幹擾物、增加檢測器靈敏度(富集) 、保護色譜柱等。

樣品預處理同時也是為了避免色譜分離故障,其中樣品萃取是關鍵的一步,要從大量的干擾物中萃取出微量組分難度極大。

有些樣品經預處理後還不能作進樣分析,需進行衍生化處理,使一些無紫外吸收或無熒光的組分,經過衍生化後能用紫外和熒光檢測器檢測,這樣既提高了靈敏度,又改善了分離度(質量變化) 。樣品預處理的同時也會帶來一些問題,如樣品損失、樣品被汙染、衍生化反映不完全或多種反應物生成等。衍生反應常會影響試驗的精確度,或者在整個樣品預處理過程中帶來誤差。

用於液相色譜分析的樣品溶液必須均勻而無顆粒,有顆粒會損壞進樣器並阻塞柱頭。處理好的樣品在準備上柱前應對準光線搖動,檢查樣品溶液中有無顆粒。

使用新色譜柱時有哪些注意事項?

簡單來說：看說明書→沖洗乾淨系統→活化柱子→效能測試，完成了就可以用於檢測樣品了。

詳細的如何維護色譜柱和色譜系統才是關鍵，詳細的介紹可以瀏覽agilent，waters等色譜網站的相關知識。

色譜柱的安裝：

1、首先應確認柱和儀器的接頭以及管路是否匹配。為減少死體積，進樣閥、柱子、檢測器之間的連線管路內徑儘可能使用內徑較小的管線，同時控制進樣器、色譜柱和檢測器之間連線管線的長度。安裝色譜柱之前，確認流路系統中的溶劑是否正常。對分析較複雜的樣品建議安裝保護柱。

2、為了使色譜柱與儀器系統達最佳的連線效果，應儘量使用與色譜柱介面相匹配的螺帽和錐形接頭，如原來的接頭長期匹配其他型別的色譜柱，建議在連線新色譜柱前應檢查匹配情況，避免造成色譜柱的損壞或因色譜柱不匹配造成的漏液。

3、使用PEEK 材料的通用接頭，只需用手擰緊不需要特定扳手，使用壓力為5000psi；使用溫度不得超過100℃。

流動相平衡：

1、在進行樣品檢測前，至少使用20倍柱體積流動相使色譜柱充分平衡。流動相一定要使用色譜級別的溶劑。如使用水相的緩衝液應當天配製以保持新鮮避免細菌產生。

2、流動相使用前需用微孔濾膜過濾,消除流動相中顆粒對色譜系統和色譜柱的損壞。緩衝液與其他流動相混合後應重新過濾避免溶解度變化造成產生新的沉澱。不應使用純水作為流動相沖洗C18色譜柱，以免柱效能損壞（新增5％的有機溶劑沖洗色譜柱，同時可以達到對緩衝鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡）。

3、流動相需脫氣後使用，可避免因氣泡導致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時使用的流動相與色譜柱儲存使用的流動相有較大區別，應該使用過度分佈的形式進行平衡。避免由於流動相的突然變化造成柱壓增加過大或流動相緩衝鹽結晶造成對色譜柱和儀器系統的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長的平衡時間。

樣品製備與操作：

1、樣品應當儘可能溶解在能與流動相相互溶的溶劑中。除特殊指明外，如使用強溶劑溶解樣品柱子的解析度將可能降低。

2、樣品溶液在進樣前應使用針頭式過濾器對樣品預先過濾。頻繁改變流動相組成，會加速降低柱效。

3、色譜柱由高壓勻漿法裝填，能承受較高壓力。為獲得最佳分離效果，使用時請不要超過200kgf，而且避免壓力突然上升或變化，否則會造成矽膠填料的破壞，減少色譜柱的使用壽命。除特殊要求外最高操作溫度不要超過60℃。

儲存色譜柱：

1、如果流動相含有酸或無機鹽，應當先用去離子水（20倍柱體積）沖洗乾淨。然後用用100％乙腈或甲醇儲存色譜柱。最後用柱子的接頭密封，並放在穩定的環境中存放。

2、應避免色譜柱受到直接的機械衝擊或摔落，避免造成色譜柱效能的降低。

色譜柱的再生：

1、用相當於20倍柱體積的溶劑按下列順序沖洗柱子，建議按柱子的箭頭方向沖洗，儘可能不反衝：沖洗時使用的的參考溶劑順序是水、甲醇、氯仿、異丙醇、甲醇。

C18色譜柱使用的日常注意事項有哪些

在使用液相色譜C18儀柱過程中，須注意以下事項：

1、新C18色譜柱在使用前，須先用甲醇或乙腈試劑以20倍柱體積低流速沖洗，作用是使固定相能充分潤溼、碳鏈舒展，使色譜柱的效能達到好狀態。具體操作是，將配製好65%的乙腈/水沖洗後，把色譜柱進口端連線在色譜儀上，出口端放空（不可連上檢測器，以免汙染了檢測器），以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速將色譜柱中的清稀溶液吹乾，過20分鐘後再接上檢測器，以1.0ml/min的流速，繼續沖洗2~8小時；

2、液相色譜儀檢測分析樣品完畢後，須沖洗色譜柱。尤其是流動相中含有酸或鹽時，需將色譜柱中的酸或鹽沖洗乾淨，通常建議用10%甲醇水沖洗20倍柱體積；

3、若色譜柱處於長期閒置狀態時，要將色譜柱沖洗，建議沖洗3-4小時以上，後儲存在純有機試劑或高比例的有機試劑溶液（如90%甲醇水）中；?

4、由於C18柱的固定相疏水性較強，在使用過程中儘量不要使用高水相條件，若水相比例過高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效迅速下降，甚至造成不可逆的負面影響；由於碳載量高，表現尤為明顯，建議使用過程中水相比例不超過90%；

5、色譜柱壓力升高、柱效能下降：通常為色譜柱被汙染，對色譜柱進行再生處理可恢復部分柱效；

6、色譜柱壓力驟升：通常由鹽析出或篩板堵塞引起，若是鹽析出，用10%甲醇水低流速衝?洗至壓力恢復即可；若判斷並非鹽析出，以純甲醇或10%甲醇水為流動相反衝色譜柱（將色譜柱反接，不接檢測器），若反衝半小時仍無效果則說明反衝無效，需尋找其他原因。

新買的C18色譜柱在使用之前要怎樣處理才能保護好它。

用甲醇：水=50:50（v/v)沖洗柱子，每次使用後都儲存在甲醇：水=50:50（v/v)的流動相中。

色譜柱怕汙染殘留和柱壓過高，殘留每次使用後都用較高比例的有機相沖洗，然後在替換到50/50的甲醇/水中。柱壓過高要儘可能避免。

其他就沒什麼了，C18柱子也不貴，除了超高壓UPLC用的柱子。壞了就換新的唄，畢竟是消耗品。

新的迪馬液相色譜柱用之前需要做哪些處理呢？

此柱填充的是反相或者極性膠聯型態的矽膠基質材料的矽膠。矽膠形態的柱子用於正相（非水）條件。

反相（C8，C18，ODS，RP-8和RP-18）通常用於反相條件（水相）。

極性膠聯型（APS，diol，CN和NH2）依照應用目的，可以用於正相和反相條件。建議不要將一個相同的柱子用於差別非常大的條件下，這是因為柱子在特定的條件下，固定相的性質會發生變化，所以在其他的條件下，會影響柱效。也不建議將矽膠柱用在反相條件下或者將方向柱用在正相條件下，這是因為這種過程會發生重複性差的問題（每一次注射之間和柱與柱之間的比較）。

色譜柱老化

在開始分析工作以前，柱子必須經過正確的老化。一個沒有正確老化的柱子可能會帶來問題，諸如很差的柱效或者分離情況發生變化等等。

A．在反相條件下老化

要老化這類柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗，然後你選用的洗脫液進行平衡。

在發貨以前，每根柱子都已經測試過並進行了老化。因此沒有必要在第一次使用時用水沖洗）。

如果流動相中使用了新增物（例如緩衝液或離子對試劑），建議使用正確比例的但不含此新增物的流動相進行緩衝沖洗。緩衝沖洗應當首先以低流速進行，最後再使用正常流速。

B．在正相條件下老化

柱效可能會受水與固定相的鍵合的嚴重影響。柱子的乾燥（啟用）或潤溼（失活）可能是需要的。使用的溶劑可能是水飽和的或者是無水的。乾燥柱子可以使用無水的二氯甲烷。

C．對於極性鍵合柱的特殊說明

由於這些柱子可以用於反相或者正相條件，在進行老化以前，一定要首先檢查你要使用的淋洗溶劑或洗脫液是否可以與封裝在柱子裡的溶劑相混溶。如果這些溶劑不能混溶，必須先使用一個合適的緩衝溶劑進行沖洗。

柱色譜中加混合樣品時應該注意哪些操作

 柱色譜的使用注意事項很多，作為精密測試儀器，我們要儘可能多的考慮能夠引起各種誤差的操作。不僅僅是加註樣品時候哦。

1. 色譜柱使用前注意事項：

色譜柱的儲存液無特殊說明，均為評價報告所示的流動相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩衝液作洗脫劑，應先用10％左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下，否則緩衝液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出，堵塞色譜柱，輕則沒有資料，重則報廢。嚇人不嚇人你說。 

2. 流動相：

在進行樣品檢測前，至少使用20倍柱體積流動相使色譜柱充分平衡。流動相一定要使用色譜級別的溶劑。如使用水相的緩衝液應當天配製以保持新鮮避免細菌產生，當然一般情況下都是隨用隨配的，沒人懶到一下配好幾天用的。

流動相使用前需用微孔濾膜過濾,消除流動相中顆粒對色譜系統和色譜柱的損壞。緩衝液與其他流動相混合後應重新過濾避免溶解度變化造成產生新的沉澱。不應使用純水作為流動相沖洗C18色譜柱，以免柱效能損壞（新增5％的有機溶劑沖洗色譜柱，同時可以達到對緩衝鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡）。

流動相需脫氣後使用，可避免因氣泡導致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時使用的流動相與色譜柱儲存使用的流動相有較大區別，應該使用過度分佈的形式進行平衡。避免由於流動相的突然變化造成柱壓增加過大或流動相緩衝鹽結晶造成對色譜柱和儀器系統的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長的平衡時間。

流動相中所使用的各種有機溶劑要儘可能使用色譜純，配流動相的水最好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經過0.45μm的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動相。另外，裝流動相的容器和色譜系統中的線上過濾器等裝置應該定期清洗或更換。

以常規矽膠為基質的鍵合相填料通常的PH值適用範圍是2.0-8.0，BDSC18適合於鹼性化合物，PH值適用範圍為2.0-10.0。當必須要在PH值適用範圍的邊界條件下使用色譜柱時，每次使用結束後立即用適合於色譜柱儲存並與所使用的流動相互溶的溶劑清洗，並完全置換掉原來所使用的流動相。

流動相PH值過大或過小使固定相結構破壞或溶解。一旦造成這種情況，很難恢復。

色譜柱由高壓勻漿法裝填，能承受較高壓力。避免壓力突然上升或變化幅度過大，否則會造成矽膠填料的破壞，減少色譜柱的使用壽命。操作溫度不要超過60℃哦，

3. 樣品：

樣品應當儘可能溶解在能與流動相相互溶的溶劑中。除特殊指明外，如使用強溶劑溶解樣品柱子的解析度將可能降低。

樣品溶液在進樣前應使用針頭式過濾器對樣品預先過濾。頻繁改變流動相組成，會加速降低柱效。

樣品也要儘可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預處理柱（SPE）對樣品進行預處理；若樣品不便處理，要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時，所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。

ps：題主認為以上囉嗦的太多麼？要知道這麼精密的儀器，用起來的囉嗦事更多，否則也對不起那麼精準的資料不是？科學要嚴謹，操作多謹慎。